Krótkoterminowa próba maślanu w celu stymulacji ekspresji genów płodu-globiny w zaburzeniach -globinowych cd

Zarodkowane komórki poddano lizie w 4 molach tiocyjanianu guanidyniowego (Fluka, St. Louis), 25 mmol cytrynianu sodu (pH 7,0), 0,5 procent sarkozylu (oba z Fisher Scientific, San Jose, CA) i 0,1 mola .- merkaptoetanol (Kodak, Rochester, NY) na litr. Całkowity komórkowy mRNA wyizolowano, a 10 .g próbek analizowano przez hybrydyzację typu slot blot do sond specyficznych dla ludzkiej .-globiny i .-globiny, jak opisano w Constantoulakis i wsp. 30 oraz Chomczyński i Sacchi40. Wyniki
Rysunek 1. Rysunek 1. Synteza płodu-globiny przed i po krótkotrwałym leczeniu maślanym. Synteza zwiększyła się u wszystkich pacjentów. Procent syntezy globiny obliczono zgodnie z następującym równaniem:
(.-globina / [.-globina + .-globina]) × 100.
Rycina 2. Rycina 2. Synteza .-globiny podczas leczenia maślanu (obszar z wysklepieniem) u siedmio letniego chorego na transfuzję z hemoglobiną E i .0-talasemią (pacjent 6). Stosunek nie-.-globin do .-globiny zwiększył się z 0,2 do 0,55 – tj. Z zakresu znajdującego się w talasemii głównej do tego występującego w pośredniej talasemii. Procent syntezy obliczono jak opisano w legendzie do figury 1.
Rycina 3. Rycina 3. Autoradiogram skrobi z całkowitego mRNA komórkowego od pacjentów przed i podczas traktowania maślanu, hybrydyzowany z sondami specyficznymi dla . lub swoistymi dla .. Pacjent 2 miał anemię sierpowatą, pacjent 4 homozygotyczną . +-talasemię i 5 homozygotyczną . Lepore, mutację fuzji genu . / .-globiny. Poziom mRNA y-globiny zwiększył się o dwa do sześciu razy podczas leczenia maślanu; poziom mRNA .-globiny nieznacznie się zmniejszył.
Ryc. 4. Ryc. 4. Stężenia hemoglobiny wolne od osocza krwi przed i podczas leczenia maślanem u dwóch dorosłych pacjentów z talasemią (pacjenci 4 i 5), którzy nie otrzymali ostatnich transfuzji przed rozpoczęciem leczenia. Poprawa stosunku nie .-globin do .-globiny spowodowana zwiększoną syntezą .-globiny spowodowała mniejsze zniszczenie erytroblastów i hemolizę. Aby przeliczyć wartości dla hemoglobiny na milimole na litr, należy pomnożyć przez 0,0006.
Rycina 5. Rycina 5. Stężenia hemoglobiny u pacjenta z talasemią leczoną infuzjami maślanu przez siedem tygodni (pacjent 5). Stężenie hemoglobiny wzrosło po poprawie stosunku non-.-globin do .-globiny. Każde koło reprezentuje jeden pomiar hemoglobiny, a linia ukośna oznacza średnią szybkość wzrostu. Aby przeliczyć wartości dla hemoglobiny na milimole na litr, pomnóż przez 0,6206.
Ta próba leczenia I-II fazy została przeprowadzona w dużej mierze w celu określenia bezpieczeństwa dawek maślanu, który mógłby stymulować produkcję hemoglobiny F i określić odpowiedzi konkretnych zmiennych hematologicznych na zakres dawek. Pomimo krótkiego przebiegu leczenia, który reprezentował tylko jeden lub dwa cykle dojrzewania erytroblastów, synteza .-globiny znacząco wzrosła u wszystkich pacjentów, z 6 do 45 procent powyżej poziomów sprzed leczenia (P <0,01 w teście parowym), niezależnie od wiek pacjentów i czy mieli oni wykrywalną syntezę .-globiny na początku leczenia (ryc. 1). Synteza drastycznie wzrosła w sposób zależny od dawki u jednego pacjenta, ciężko dotkniętego transfuzją siedmioletniego chłopca z hemoglobiną E i .0-talasemią (ryc. 2) [hasła pokrewne: objawy dny moczanowej, koramed, więzień labiryntu cda lektor ]